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中山大學顏光美團隊病毒一種可以“殺死癌癥”的病毒，三年前在全球首次發現時引發轟動。現在，這種抗癌新藥“溶瘤病毒M1”的研究有了最新進展。
胡駿副教授和邱鵬新研究員，在食蟹猴模型中進行溶瘤病毒M1安全性評估。
中山大學顏光美的團隊，昨日向外界公布“溶瘤病毒M1”的最新進展。
一種可以“殺死癌癥”的病毒，三年前在全球首次發現時引發轟動。現在，這種抗癌新藥“溶瘤病毒M1”的研究有了最新進展。中山大學藥理學教授顏光美的團隊稱，不僅在猴子這一非人靈長類動物身上證實了M1病毒的安全性，還發現和其他藥物聯用讓M1增效的機制。顏光美還帶來了臨床試驗的最新消息，“預計2018年可以進行M1病毒的臨床試驗。”
或可享受綠色通道
藥物有望快速進入臨床試驗
2014年，顏光美的實驗團隊在全球內首次發現，在自然界存在的病毒M1具有選擇性殺傷多種腫瘤細胞的特性。這種在海南蚊蟲上發現的病毒，只在馬和豬之間傳播，但被團隊證實，可以鉆入癌細胞體內，通過擴增裂解方式殺傷腫瘤細胞，“以毒攻毒”。
顏光美團隊在小鼠和人體腫瘤組織上進行的實驗顯示，M1對肝癌、結直腸癌、膀胱癌細胞的殺傷作用最明顯，對黑色素瘤、腦癌和前列腺癌等癌細胞也起作用。實驗發現，M1病毒對體外培養的部分人類癌癥細胞，抑制率高達90%；對腫瘤模型小鼠體內的癌細胞，抑制率達50%-60%.他們還對臨床病例中切除下來的腫瘤組織進行實驗發現，對敏感病例的癌組織的抑制率達60%-70%.所謂抑制率，指的是M 1病毒殺死腫瘤或抑制腫瘤增殖的比率。論文發表在2014年10月2日的《美國國家科學院院刊》上，經國內媒體報道后，引起轟動。
又是三年，顏光美說，自2014年研究被報道伊始，每個星期，都有患者發來郵件，希望使用病毒制劑，或是詢問研究進度。來自齊齊哈爾的一家四口人，甚至直接登門拜訪。顏光美盡量一一回復，“我很理解，親人得了癌癥，是什么樣的心情。人的精神向往會產生很大的作用，有了期待，也許病人就能等到那一天。”
除了患者，這項研究也得到了省領導的關注。溶瘤病毒M 1的臨床轉化研究，還獲得國家“十三五”重大新藥創制科技重大專項資金的支持。在這些支持下，溶瘤病毒M 1將可能享受綠色通道以更快的速度進入臨床試驗。現階段，顏光美教授課題組正在緊鑼密鼓地進行新藥申報前的臨床前研究，他說，有望2018年申請臨床試驗批件，正式進入臨床試驗階段，屆時，部分受試患者就能最先注射到這一藥物。
抗癌新藥研發已走了一半
“最終療效要用臨床說話”
“整個研究還算順利，除了睡著的幾個小時沒考慮（這項研究），其他時間都在考慮。”今年顏光美已有60歲，因為年齡原因，他退出了中山大學副校長這一領導崗位，有媒體希望專訪他，被拒絕了。“我說自己主要的興趣在研究上，如果有了科研進展，我會跟大家溝通。”
獲得了眾多關注的目光，讓顏光美更加珍惜時間，退下來后，顏光美一天都沒休息過。團隊的成員凌晨一兩點，可能也會接到他的微信。但顏光美很欣喜，因為現在精力很集中，“100%花在研究工作上，這兩三月研究的進展特別快，這是我特別覺得高興的事情。如果有機會做成新藥，那是非常幸運的。”
這幾年來的科研進展和技術突破，讓顏光美充滿信心，如果把研發抗癌新藥的過程比作10公里長跑，2014年，顏光美接受南都記者采訪時認為，團隊才順利跑完了第一公里，而現在，“比較穩健地說，已經走完一半了。感覺已經沒有跨不過去的技術門檻，做成了不是問題，沒做成功那才是問題。”
但對于將來藥物臨床使用可能達到的效果，顏光美始終持審慎態度，“最終一定要用臨床治療來說話，現在動物試驗做得再漂亮，也只是動物試驗，一定要病人試了才知道，如果再往前講，就過線了。”但顏光美認為，該藥物研發最低的要求、最基本的期待是“延長腫瘤患者的生存期”。
背景
M1病毒曾被封存40年
M1病毒的發現可以追溯至上世紀60年代。1964年，一群科學家在海南島“抓獲”了50只蚊子，從這些蚊子體內，他們分離出了這種病毒。他們發現，M1除了在馬和豬身上會引起非常輕微的類似感冒的癥狀，對人和絕大多數動物都幾乎沒有致病性。于是，這群科學家對M1喪失了興趣，病毒被封存。
2004年，當時正在做博士論文的胡駿在一次實驗中偶然發現，M1病毒可以將大鼠來源的膠質瘤細胞溶解掉。
2009年，在《細胞周期》（Cell Cycle）上，顏光美與胡駿發表了論文，報告了他們在M1病毒身上的新發現———這種病毒在體外試驗中能夠殺滅癌細胞。2014年發表在《美國國家科學院院刊》上的論文，經國內媒體報道后，引起轟動。
溶瘤病毒是一類具有復制能力的腫瘤殺傷型病毒，M1病毒也是其中之一。近幾十年來，溶瘤病毒治療引起了廣泛關注。世界上最早關于溶瘤病毒的報道出現在上世紀50年代，當時發現一名子宮頸癌患者在感染狂犬病病毒后，腫瘤隨之消退。
幾十年間，溶瘤病毒在美國得到重視和大量研究，美國Amgen公司的溶瘤病毒免疫治療藥物T-Vec已經上市。
“研究也提示其他溶瘤病毒，可以試著跟腫瘤藥物聯用，進行增效。”顏光美說。
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揭秘
A
一年多住在猴廠不定期給食蟹猴注射M1
自然界存在的病毒中，只有一小部分會讓人體致病。團隊通過體外細胞系和小動物模型上證實，M 1病毒雖然可以攻破腫瘤的防線，但對正常細胞并沒有損傷作用。
但病毒是否會對人體有毒副作用？在2014年成果公布后，團隊緊鑼密鼓挑選了“最接近人類”的非人靈長類動物食蟹猴進行驗證。團隊成員、中山大學副教授胡駿在肇慶找到了合適的實驗猴廠，這里既能給猴子做B超，還能做CT、核磁共振（M R I），“廣州醫院也有核磁共振，但猴子去做肯定不方便。”
接下來的兩年里，胡駿有一半時間就住在山上的猴廠，不定期地給食蟹猴靜脈注射了18次溶瘤病毒M 1，密切記錄食蟹猴的日常行為表現、生化指標和重要器官的影像結果。“在這個過程中，每天也提心吊膽，每次檢查結果出來就趕緊去看。”胡駿說。數據結果讓人欣喜：在觀察的半年時間內，食蟹猴都沒有出現任何不良臨床反應，核磁共振檢查也未發現任何器官出現損害。
為什么是18次？顏光美說，因為怕反復注射引起人體過敏反應等副作用，因此在食蟹猴身上注射了多次，“如果一個療程使用6次，那我們打18次，看會不會有影響。”“在猴子身上是安全的，在人身上有很大的機會也是安全的。這個結果強烈提示，M 1病毒具有良好的安全性，為將來M 1病毒在臨床的應用提供了保障。”顏光美說。這一成果也于2016年6月22日，發表在基因治療領域的權威期刊《人類基因治療》。
B
M1病毒使用增效劑后抗腫瘤活性提高3600倍
除了驗證M 1病毒的安全性，顏光美也在考慮另一個問題：抗癌藥物研發已有200年歷史，針對各種癌癥的藥物達數百種之多，知識有一個繼承關系，M 1病毒和現有的抗癌藥物有無協同作用？為此，團隊的博士張海鵬帶領另外三位博士，挑選了350種有代表性的小分子靶向藥物，篩選了8個月。
在對比后，張海鵬等人逐漸縮小范圍，并定格到一類靶向內質網相關降解通路（ER AD）的抗癌藥物，它適用于多發性骨髓瘤和多種晚期實體瘤。課題組在小鼠的肝臟上注射人肝癌細胞，建立了原位肝癌模型，并對小鼠注射低劑量的溶瘤病毒和E R A D抑制劑，結果顯示，小鼠的生存期延長了一倍以上。單獨使用低劑量M 1病毒攻擊，腫瘤模型小鼠體內的癌細胞，抑制率為23.6%.而在用了增效劑后，抑制率提高至72.3%.
臨床腫瘤手術標本的離體培養組織上，這一聯合應用的效果也得到驗證。并且，此聯合療法在食蟹猴模型上沒有引起不良反應。不止如此。這一抗癌藥物能顯著增強M 1病毒的抗腫瘤活性，增幅高達3600倍。“比如，以前用1個病毒可以殺傷1個腫瘤細胞，現在能殺傷3600個。”“溶瘤病毒M1是自動鎖定腫瘤細胞的制導導彈，而E R A D抑制劑的加入，如同在導彈上綁定了自帶篩選功能的烈性炸藥包，強強聯手，效果不言自明。”顏光美說，這也給研究帶來了新思路，病毒M 1除了“單打獨斗”外，也可以和別的藥物聯用提高療效。
有意思的是，兩種藥物是否應該搭配應用于病人，“有據可循”。“通過檢測E R A D通路中一個叫做V CP的蛋白質來預測。”張海鵬解釋，具體來說，如果腫瘤組織上的V CP蛋白高表達，提示病人適合溶瘤病毒M 1和ER A D抑制劑聯合方案，如若低表達，則代表不適合。讓人興奮的是，在肝癌病人中，腫瘤組織高表達V C P是很常見的。該治療方案將給難治的肝癌帶來新希望。但張海鵬說，不只是肝癌，該方案對膀胱癌、結直腸癌也有顯著的增效作用，“不同的腫瘤或許可以篩選出不同的增效劑。”這一研究成果也在2017年8月24日凌晨發表在國際上轉化醫學領域的權威期刊《科學·轉化醫學》。
C
溶瘤病毒M1可以引發腫瘤細胞“內斗”
在研究過程中，團隊博士生蔡靜偶然的新發現，破解了另一謎題。在一次做實驗時，蔡靜用標記上紅色熒光的M 1病毒感染腫瘤細胞，感染后，如果細胞帶有紅色標記，說明感染上了病毒。隨后，她對腫瘤細胞進行“凋亡染色”，發現一個有意思的現象：被感染的腫瘤細胞周圍，有很多旁邊的腫瘤細胞沒有紅色標記，即沒有感染M 1病毒，但也發生了死亡。
是誰殺死了這些旁邊的腫瘤細胞？隨后的兩年多時間里，蔡靜專注破解這一難題。最終她發現，M 1病毒居然可以誘導腫瘤細胞，釋放具有細胞毒性的因子，進而殺傷這些細胞周圍尚未感染M 1的腫瘤細胞。這是一種非常有趣的現象，學術界稱之為“旁觀者效應”，意為處于感染細胞周圍的旁觀細胞遭受殺滅。
而且，實驗發現，30%癌細胞是被M 1病毒殺死的，而剩下的70%，均是被癌細胞放出的因子殺死的。顏光美如是解析這一現象：病毒要在活細胞里生存，如果試著從腫瘤細胞的角度來理解這種行為，可以發現，腫瘤細胞在受到溶瘤病毒脅迫時，似乎抱著一種“斷臂求生”的心態釋放信號，殺滅周圍的細胞，讓病毒無法靠近，以保全遠端的腫瘤細胞。這一創新性的成果，于2017年6月27日發表在國際上具有很高影響力的權威期刊《美國國家科學院院刊》。
釋疑
新藥離上市還有多久？
已制備注射制劑，上市時間尚無法預估
按照法律規定，新藥研發需通過科學研究，臨床前，用于人體的一、二、三期臨床試驗等階段，才可以上市銷售，用于臨床治療患者。一期臨床試驗考查藥物的安全性，二期考查藥物的有效性，三期試驗用數量更多的實驗樣本進一步研究，上市后還要在臨床中進行大規模的研究，驗證藥效。
顏光美說，目前，團隊研發藥物的工藝技術難題已經解決，M 1病毒經過發酵、純化的步驟后，最后將制成凍干粉，成為靜脈注射的制劑。國際上現行使用的溶瘤病毒注射液，需要將溶液冷凍到負80℃，運輸受到限制。而制成凍干粉，可以放置在2℃-8℃環境當中，普通冰箱即可保存，使用很方便。顏光美說，藥物純化是極為艱難的步驟，不少研發藥物走到這一步后，止步不前。“打通了這個技術關節，我扎扎實實高興了好幾天。”
目前，團隊正在進行新藥申報前的臨床前研究，預計2018年可以進行M 1病毒的臨床實驗，屆時，藥物將可在病人身上進行首試。“做完一期試驗，最快需要一年時間。”顏光美說，新藥審批需要多長時間，“這不是我能決定的，時間還沒辦法預估。”
病毒是否對所有腫瘤有效果？
11種癌癥均有不同抑制效果
顏光美說，今年3月，美國FDA批了一類抗癌生物標志物，如果多種癌癥都具有這個生物標志物的話，則可被批準治療。“這是未來抗癌藥物發展的新方向，這就是我們計劃做的。”
目前研究顯示，溶瘤病毒M 1對10種高發癌癥（肺癌，肝癌，結直腸癌，乳腺癌，胰腺癌，前列腺癌，宮頸癌，膠質瘤，鼻咽癌，胃癌），以及廣東高發的鼻咽癌都有不同程度的抑制作用。
此前，該團隊已找到M 1病毒靶向殺傷癌細胞的特征物———鋅指抗病毒蛋白（ZAP）。目前，針對ZA P的診斷試劑盒已在報批，VCP的診斷試劑盒已準備委托公司研發。
如若新藥成功研發，這11種腫瘤病人可以先通過檢測，確定體內癌細胞缺乏ZA P，便可以進行溶瘤病毒M 1治療。如果V CP蛋白高表達，病人則適合溶瘤病毒M 1和ERA D抑制劑聯合方案。
出品：南方都市報科學新聞工作室
